经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究

来源：网络时间：2023-07-29 06:41:26

导读中药大品种联盟

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究(图1)

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来源于《中医药学报》，2021,49（6）

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究

何瑞欣1 ，井山林1 ，张晓云1 ，王琪1 ，徐雅蝶1 ，李秋桐1 ，嵇晶1 ，黄仕文2 ，程建明1 通讯作者

( 1.南京中医药大学江苏省中药功效物质重点实验室，江苏南京 210023;

2．南京中医药大学中医学院·中西医结合学院，江苏南京 210023)

2018 年国家中医药管理局官网发布了《古代经典名方目录( 第一批) 》，业界随即掀起经典名方研发热潮。但是，部分经典名方在药材( 基原、产地加工、炮制等) 、剂量、制备工艺与设备等方面存在诸多问题，如原文中制备工艺信息不完善等，这很大程度上制约着经典名方的现代开发。本实验在文献考证及前期研究的基础上，依照《古代经典名方中药复方制剂物质基准的申报资料要求(征求意见稿) 》，对半夏厚朴汤物质基准的制备工艺进行了尊古而不泥古的系统研究。半夏厚朴汤出自汉代张仲景的《金匮要略》，原文描述: “妇人咽中如有炙脔，半夏厚朴汤主之”，处方为半夏一升，厚朴三两，茯苓四两，生姜五两，苏叶二两。原文煎煮及服用方法为: “上五味，以水七升，煮取四升，分温四服，日三夜一服”。目前该方具有较好开发前景，不仅在消化、呼吸系统等方面临床应用广泛，在内分泌科、五官科、妇科及心理精神科也有较多应用。本实验建立检测多指标成分筛选工艺的方法，参照《古代经典名方中药复方制剂物质基准的申报资料要求( 征求意见稿) 》考察煎煮、滤过、浓缩、干燥工艺方式，结合质量评价为多批次物质基准质量标准及该方制剂研究提供参考。

1材料

1.1 仪器与试剂

2 L 陶瓷药罐( 壶福有限公司) ; 十万分之一电子分析天平( 型号: BT 125D，赛多利斯科学仪器有限公司) ; 万分之一电子分析天平( 型号: STP FA2004，上海上平仪器有限公司) ; 高效液相色谱仪( 型号: 2695e，美国沃特世科技有限公司) ; 旋转蒸发仪( 型号: R － 210，瑞士布奇公司) ; 喷雾干燥机( 型号: B － 290A，瑞士布奇公司) ; 低速离心机( 型号: TDL－5－A，上海安亭科学仪器厂) ; 数控超声波清洗器( 型号: KQ－ 500DE，昆山市超声仪器有限公司) ; 真空冷冻干燥机 ( 型号: 738707C，Labconco 公司) ; DZF－6050 真空干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) 。甲醇( 批号: 19070482，美国天地公司) ; 乙腈(批号: 19090095，美国天地公司) ; 甲酸( 批号: H1913009，美国阿拉丁工业公司) ，以上试剂均为色谱纯。

1.2 药材及饮片

姜半夏饮片( 批号: 190701，产地: 贵州，安徽省万生中药饮片有限公司) ; 厚朴(批号: 2019012201，产地: 湖北建始) ; 茯苓( 批号: 2018090302，产地: 安徽岳西) ; 生姜( 批号: 2019110601，产地:云南蒙自，和达农业公司) ; 紫苏叶( 批号: 20180809，产地: 安徽太和，太和县月芳药材种植专业合作社) 。以上药材经南京中医药大学刘训红教授鉴定均符合 2015 年版《中国药典》药材及饮片标准，含量测定均合格。

1.3 对照品

和厚朴酚对照品( 批号: 110730－201614，纯度: 99.3% ) ; 厚朴酚对照品(批号: 110729－201714，纯度: 100．0% ) ; 6－姜辣素对照品( 批号: 110842－201709，纯度: 91.7% ) ; 野黄芩苷对照品 (批号:111871－201706，纯度: 90.5% ) ; 迷迭香酸对照品( 批号: 111833－201806，纯度: 99.9% ) ，5 种对照品均购于中国食品药品检定研究院。

2方法与结果

2.1色谱条件

Agilentzorbaxeclipsexdb－phenyl ( 4.6 mm × 250 mm，5μm) ，流动相乙腈( A) － 0.2% 甲酸水( B) ，梯度洗脱( 0 ～ 50 min，5%～ 25% A; 50 ～ 65 min，25% ～ 50% A; 65 ～75 min，50% ～ 65% A) ，流速1mL·min-1 ，紫外检测波长 282nm，柱温 30℃ ，进样体积 10 μL。在此条件下，半夏厚朴汤物质基准煎液中间体( 以下简称中间体) 供试品溶液中的和厚朴酚、厚朴酚、6－姜辣素、野黄芩苷、迷迭香酸与其他成分分离较好，见图 1。

2.2对照品溶液的制备

精密称取和厚朴酚 3.39 mg，厚朴酚 3.32 mg，6－姜辣素 5.17 mg，野黄芩苷 5.28 mg 及迷迭香酸5.31 mg，置于 100 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，制成每 1 mL 含和厚朴酚 33.90 μg，厚朴酚 33.20 μg，6－姜辣素 51.70 μg，野黄芩苷 52.80 μg及迷迭香酸 53.10 μg 的对照品溶液。

2.3物质基准的制备

煎煮工艺: 按处方量姜半夏 15 g，厚朴 9 g，茯苓 12 g，生姜 15 g，紫苏叶 6 g，加自来水 1 400 mL 于煎煮容器中，按实验所需的各浸泡时间、紫苏后下时间、煎煮容器、火力及加盖与否等考察项目进行煎煮，煎煮至800 mL。

过滤工艺: 采取上述最佳煎煮工艺煎煮好后分别趁热 80 ℃ 和常温用双层 200 目尼龙纱布、双层 100 目尼龙纱布、抽滤、5 000 r·min-1离心 10 min、4 层普通纱布的方式过滤。

浓缩工艺: 采取上述最佳煎煮、过滤方式制备好后浓缩温度分别用 50、60、70、80 ℃ 减压浓缩至1.0 g·mL-1 ，并用最佳温度分别减压浓缩至不同终点生药量 1.0、1.3、1.6、2.0 g·mL-1 。

干燥工艺: 采用经上述最佳煎煮、滤过、浓缩工艺得到的浓缩液，进行喷雾、真空、冷冻干燥。

2.4供试品溶液的制备

煎煮液、滤液: 精密取 1 mL 药液加 2 mL 甲醇，混均仪混匀后 5000 r·min -1离心 10 min，取上清液过0.22μm 滤膜，即得。

浓缩液: 精密取 2 mL 浓缩液于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，混均仪混匀后 5 000 r·min -1离心 10 min，取上清液过 0.22 μm 滤膜，即得。

物质基准对应实物: 称取 0.5 g 冻干粉加 50 mL水超声处理( 功率 500 W，频率 40 kHz) 30 min 后滤过，精密取 2 mL 滤液于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，混均仪混匀后 5 000 r·min-1 离心 10 min，取上清液过 0.22 μm 滤膜，即得。

2.5方法学考察

精密度: 取同一物质基准供试品溶液，按 2.1 项下色谱条件连续进样 6 次，记录色谱图。以 2 号色谱峰( 迷迭香酸) 为参照峰，计算共有峰相对保留时间、相对峰面积得 RSD 均≤3.0% ，表明仪器精密度良好。

重复性: 取物质基准供试品溶液 6 份，按 2.1 项下色谱条件测定，记录色谱图。以 2 号色谱峰( 迷迭香酸) 为参照峰，计算共有峰相对保留时间、相对峰面积得 RSD 均≤3.0% ，表明仪器重复性良好。

稳定性: 取物质基准供试品溶液 1 份，分别在制备后 0、2、4、8、24 h 按 2.1 项下色谱条件测定，记录色谱图。以 2 号色谱峰( 迷迭香酸) 为参照峰，计算共有峰相对保留时间、相对峰面积得 RSD 均≤3.0% ，表明物质基准供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。

2.6指标成分转移率和出膏率及权重说明

2.6.1 指标性成分总转移率的测定

按照 2015 年版《中国药典》( 一部) 测定厚朴饮片中和厚朴酚及厚朴酚、生姜中 6－姜辣素含量分别为4.16% ，0.18% ，按研究者李丹阳等文献方法测紫苏叶野黄芩苷与迷迭香酸总含量为 2.1% 。总转移率用于计算权重评分筛选最优工艺。

指标性成分总转移率 = mx/ (W × M × 103)× 100%

式中: mx 表示( x = 0 表示中间体，x = 1 表示浓缩液，x = 2 表示干燥品) 指标成分的含量，mg; W 表示饮片中指标成分的质量分数; M 表示饮片投料量，g。

工艺步骤单元操作转移率的计算: 单元操作转移率用于工艺验证环节证明是否稳定可行。

浓缩工艺单元转移率 = m1/m0 × 100%

式中: m1 表示浓缩液中指标成分含量，mg; m0 表示中间体中指标成分含量，mg。

干燥工艺单元转移率 = m2/m1× 100%

式中: m2 表示干燥品中指标成分含量，mg; m1 表示浓缩液中指标成分含量，mg。

2.6.2 出膏率的测定

精密吸取半夏厚朴汤滤液 50 mL，置于已经干燥至恒重重量的蒸发皿中，水浴蒸干后，移至 105 ℃ 的烘箱中，干燥 3 h，移至减压干燥器中冷却 30 min，迅速精密称定质量。

出膏率 = m/M × v/50 × 100%

式中: m 为蒸干固体质量，g; M 为投药量，g; v 为总滤液量，mL。

2.6.3权重评分

根据半夏厚朴汤君臣佐使配伍规律、各成分含量的多少以及各成分药效强弱，将 3 类指标成分及出膏率作为权重指标予以量化，根据参数影响程度综合评价，筛选最佳工艺条件。成分含量受出膏率(或干粉得率) 影响，出膏率( 或干粉得率) 是评价复方质量的重要指标，三类成分与复方功效息息相关，煎煮、滤过、干燥工艺出膏率( 或干粉得率) 权重系数为 4，和厚朴酚与厚朴酚转移率权重系数为 2，6－姜辣素转移率权重系数为 2，野黄芩苷和迷迭香酸转移率权重系数为 2; 浓缩工艺成分易丢失，和厚朴酚及厚朴酚是臣药中的成分且复方中含量比重大，故浓缩工艺和厚朴酚与厚朴酚转移率权重分配为 4，6－姜辣素转移率权重系数为 3，野黄芩苷和迷迭香酸转移率权重系数为 3，以各指标最大值作参照对同一指标各数据进行处理得到标准化数据，计算权重评分。

权重评分 = { ( xi ) × 权重系数 × 100% }

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究(图2)

式中: xi是该组因素某一水平项下指标成分转移率，xmax 是该组因素项下指标成分最大转移率。

数据处理: 以上所有实验均平行 2 次，且平行进样，用 Excel 2010 计算。

2.7物质基准的煎煮工艺研究

2.7.1 不同浸泡时间制备供试品溶液

按 2.3 项下煎煮工艺处方量称取饮片于药罐，加水，浸泡 0、15、30、60 min 后，煎煮，按 2.4 项制备煎液供试品溶液，见表 1。

2.7.2 不同紫苏后下时间制备供试品溶液

按 2.3 项下煎煮工艺处方量称取饮片于药罐，紫苏分别不后下、距煎煮结束前 5、10、15、20 min 放入煎煮，按 2.4 项制备煎液供试品溶液，见表 2。

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究(图3)

2.7.3 不同火力及加盖与否制备供试品溶液

按 2.3 项下煎煮工艺处方量称取饮片于药罐，分别武火煮沸后文火加盖、武火煮沸后文火不加盖、一直武火加盖、一直武火不加盖煎煮，按 2.4 项制备煎液供试品溶液，见表 3。

2.7.4 不同煎煮容器制备供试品溶液

按 2.3 项下煎煮工艺处方量称取饮片于壶福牌2L、3 L 陶瓷药罐、康雅顺 2 L 陶瓷、2 L 紫砂药罐、航方2 L紫砂药罐煎煮，按 2.4 项下制备煎液供试品溶液，见表 4。

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究(图4)

优选煎煮工艺: 综上，在遵循古籍原文的基础上，以各工艺权重评分最高者为最佳煎煮工艺条件。从结果可知，随着浸泡时间的增加，综合评分呈先下降后上升再下降的趋势，且在 30 min 达到最大; 后下野黄芩苷及迷迭香酸含量高于不后下，且随煎煮时间的增加含量先增加后减少，煎煮结束前 15 min 加入时出膏率和成分含量相对较高; 加盖武火煮沸后文火煎煮出膏率及成分含量最大; 壶福 2 L 陶瓷药罐综合评分最高。故最佳煎煮工艺为称取规定量处方饮片，置于2 L壶福牌陶瓷药罐中，加水1400 mL，加盖，浸泡30 min，用药罐配套电炉武火( 功率 500 W) 加热至沸，改用文火( 功率200 W) 保持微沸约165 min，加入紫苏叶保持微沸 15 min，煎煮至煎液 800 mL。

2.8物质基准的滤过工艺研究

不同过滤方式制备供试品溶液按最优工艺煎煮，按 2.3 项下过滤工艺过滤，按 2.4 项下制备过滤供试品溶液，见表 5。

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究(图5)

优选滤过工艺: 以各工艺权重评分最高者为最佳煎煮工艺条件，由上表可知，煎液采用双层 200 目尼龙纱布趁热过滤的综合评分最高，普通纱布吸附药液量大故不采用，最佳过滤工艺为在常压下，采用 200 目双层尼龙纱布趁热( 80 ℃ ) 过滤。

2.9物质基准的浓缩工艺研究

2.9.1不同浓缩温度制备供试品溶液

按最优煎煮、过滤工艺制备煎液，按 2.3 项浓缩工艺条件减压浓缩，按 2.4 项下制备浓缩供试品溶液，见表 6。

2.9.2不同浓缩终点制备供试品溶液

按最优煎煮过滤工艺制备煎液，50 ℃ 减压浓缩至3.3项下终点，按 2.4 项下制备浓缩供试品溶液，见表 7。

经典名方半夏厚朴汤物质基准制备工艺研究(图6)

优选浓缩工艺: 以各工艺权重评分最高者为最佳煎煮工艺条件，从结果可知，随着浓缩温度和浓缩终点浓度升高指标成分含量呈下降趋势，故最佳浓缩工艺为在 50 ℃ ( -100 kPa) 下浓缩至 57 mL ( 相当于每1mL含生药 1.0g) 。

2.10物质基准的干燥工艺研究

不同干燥方式制备供试品溶液按最优煎煮、过滤、浓缩工艺制备浓缩液，按 2.4 项下制备干燥供试品溶液，见表 8。

优选干燥工艺: 以各工艺权重评分最高者为最佳煎煮工艺条件，从结果可知，喷雾干燥干粉得率较低，损失较大，冷冻干燥能较好保留指标成分，故最佳干燥方式为冷冻干燥。

3 批工艺验证: 按 2.3 项下处方量制备 3 批物质基准，和厚朴酚及厚朴酚、6 －姜辣素、野黄芩苷、迷迭香酸水提工艺单元平均转移率为 8.37% ，55.17% ，95.49% ，浓缩工艺单元平均转移率为 82.24%，82.33% ，77.57% ，干燥工艺单元平均转移率为

62.85% ，89.18% ，72.43% ，出膏率平均值为17.15%，平均干粉得率 14.00% 。物质基准和厚朴酚及厚朴酚 RSD 为 3.18% ，6－姜辣素 RSD 为 2.47% ，野黄芩苷和迷迭香酸 RSD 为 2.98% ，出膏率 RSD 为 0.75% ，干粉得率 RSD 为 3.14% 。RSD 均小于 5% ，均未出现离散数据，工艺稳定可行。

3讨论

3.1制备工艺合理性

半夏厚朴汤由于历史悠久，剂量换算的问题一直饱受争议，药材基原、炮制、剂量等研究应遵循经典并符合《中国药典》为原则，关于东汉剂量折算有多种主流观点，半夏厚朴汤剂量的文献研究相对较少，较符合现代临床有效使用剂量的为施铮等的剂量折算验证研究，通过检索、筛选多个数据库文献搜集半夏厚朴汤干预梅核气的随机对照实验并进行 Meta 分析，结合李时珍等明清医家久经验证的折算，认为 1 两折合3 g 临床疗效显著且相对较接近《中国药典》剂量规定，是值得经典名方研究借鉴的。李陆杰等经文献考证，根据“遵从经典，符合药典”的原则，结合历代演变及临床使用经验，采用“古之一两，今之一钱”的观点，建议半夏厚朴汤中半夏的用量为 15 g; 张金良等人对半夏厚朴汤进行方源探析认为“一升”应折合后世“五两”，即 15 g。半夏经过炮制可以降低毒性，更好地发挥药效，姜制半夏古代开始便有记载且逐渐形成现代姜半夏的炮制方法。根据“尊古而不泥古”的原则，以配伍和功效为依据，兼顾古时文献记载方法和现代《中国药典》要求，建议半夏厚朴汤中使用姜半夏作为君药，可化痰散结，符合临床情绪郁结所致的梅核气病证需要，结合厚朴降逆气，痰气并治，可起到化痰降逆的疗效。工艺过程中的质量评价建立了适用于生产环节的评价方法，着重出膏率及转移率，工艺质控基于质量源于设计理念，侧重全成分的质量稳定均一。

3.2指标成分的选择

该方成分含量复杂，具有抗抑郁失眠、调节胃肠道功能、利咽镇吐等作用，中医认为七情郁结，肺失宣降，进而聚津为痰，痰结扰神，半夏厚朴汤属理气方，君臣两药化痰散结，生姜止吐，茯苓健脾化痰安神，紫苏叶宣肺理气。和厚朴酚、厚朴酚、6－姜辣素及野黄芩苷都有神经保护作用，厚朴酚还有双向调节胃肠运动和抗抑郁、保护神经的作用，生姜中的 6-姜辣素有很好的止吐作用，迷迭香酸具有抗抑郁焦虑作用，野黄芩苷也有保护神经作用，与复方功效有显著相关性，且这五者含量相对较高，具有代表性，因此确定这五个成分为工艺筛选含量测定的指标成分。查阅文献发现国内半夏厚朴汤前期研究含量检测仅限于和厚朴酚及厚朴酚，未有加入紫苏叶成分的报道，本研究可同时检测 5 种成分。对比日本药典中半夏厚朴汤质量检测，本实验提高了质控条件。但本研究未涵盖姜半夏质控方法，姜半夏是该方君药，其药理作用与复方有千丝万缕的联系，可能含有关键质控成分，有待进一步研究，后期应寻找方法监测姜半夏质量，以便更全面地控制整体质量。

3.3 工艺过程中成分变化规律

由于加水量和滤液量原文已确定，故煎煮时间随之确定。迷迭香酸和野黄芩苷在水溶液中加热温度越高或加热时间越长稳定性越差，本研究结果表明紫苏叶后下对中间体野黄芩苷和迷迭香酸转移率影响明显，后下高于共煎且随紫苏叶煎煮时间增长而先增加后减少; 浓缩、干燥温度低时其转移率相对高，冷冻干燥时由于光对迷迭香酸影响较大故采取避光。6－姜辣素为热不稳定成分，实验结果表明浓缩温度升高、时间加长，其含量下降，冷冻干燥其转移率最佳。结果显示和厚朴酚及厚朴酚转移率偏低，因为两者为强脂溶性成分，传统水煎液提取率低。加甲醇复溶可以保护色谱柱，考察了水超声复溶( 加甲醇定容) 、50% 甲醇、70% 甲醇、100% 甲醇超声复溶，以指标成分峰面积总和与称样量之比考察最佳复溶溶剂，结果显示采用水超声加甲醇定容的方式，色谱峰的峰面积相对较大，能较好反映各成分信息。主要物质群从饮片－煎液－浓缩液－物质基准传递完整，浓缩和干燥工艺未造成主成分峰面积明显丢失，故工艺过程科学合理。